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ELISA包被的方式論述
  • 發布日期:2025-03-24      瀏覽次數:654
    •   ELISA(酶聯免疫吸附試驗)中的包被是將抗原或抗體固定到固相載體表面的關鍵步驟,通常使用聚苯乙烯微孔板作為載體。包被的方式包括直接包被和間接包被兩種:
       
        直接包被:適用于天然蛋白和重組蛋白。將抗原或抗體溶液直接加入到微孔板中,通常在pH 9.0-9.6的碳酸鹽緩沖液中,室溫或4°C孵育過夜,以確保抗原或抗體充分吸附到載體表面。
       
        間接包被:用于小分子抗原或不穩定抗原。通過將小分子抗原偶聯到載體蛋白如牛血清白蛋白(BSA)或卵清蛋白(OVA)上,形成較大的復合物后再進行包被,或采用間接捕獲法,先用特異性抗體包被,再通過抗原與抗體的結合實現固相化。
       
        包被液的選擇也很關鍵,常見的有pH 9.6的碳酸鹽緩沖液和接近生理pH值的磷酸鹽緩沖液。包被的溫度一般在室溫(18-25°C)或4°C進行,有時也可在37°C孵育2小時以加速反應。包被濃度通常為10ug/ml-20ug/ml,具體需根據載體和包被物的性質調整。包被完成后,為了封閉非特異性位點,防止后續步驟中的干擾,通常會使用牛血清白蛋白(BSA)、脫脂奶粉等封閉劑進行封閉處理。封閉劑的選擇應根據實驗的具體需求和背景噪聲來確定。
       
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